上世纪40年代，Draize试验在化妆品眼刺激性毒理评价方面发挥了重要作用，而后随着动物保护运动的开展、动物实验的“3R”原则的提出以及法规的日益重视，易操作、具有科学性的动物替代实验也广受欢迎。根据《化妆品功效宣称评价规范》，宣称温和（无刺激）可以通过实验室试验、消费者使用测试、人体功效评价试验等方式，可以同时结合文献资料或研究数据分析结果，进行功效宣称评价。

其中实验室试验有多个不同模型的测试方法，比如：

①鸡胚模型，可进行鸡胚绒毛尿囊膜试验（HET-CAM）、鸡胚绒毛尿囊膜血管试验（CAMVA）、鸡胚尿囊膜台盼蓝染色试验 （TBS-CAM）；

②体外组织模型，较为常用的有牛角膜浑浊和渗透性试验、重建人体表皮模型体外测试；

③细胞模型，相关实验有短时间暴露试验（角膜细胞试验）、荧光素漏出试验、红细胞溶血试验等。

其中，短时间暴露试验（角膜细胞试验）在2015年通过验证，并且是被经济合作与发展组织采纳的眼刺激性替代方法。今天小编带大家了解一下角膜细胞试验。

角膜细胞试验即使用细胞作为模型的实验室试验中的短时间暴露试验。其采用的模型是SIRC细胞，是家兔眼角膜的上皮纤维细胞。实验原理是化学物中的毒性物质引起的角膜上皮损伤以及刺激反应类似于细胞毒性对细胞的损伤作用。通过将化妆品原料、化学品在短时间内直接作用于SIRC细胞上，反应时间5min，最后通过计算细胞的相对存活率来评估受试物的刺激性。

关于角膜细胞试验的方法有两种，分别来自：

①《化妆品安全技术规范》2022的征求意见稿，第六章。

② SN/T 3084.2-2014进出口化妆品眼刺激性试验 第2部分：角膜细胞试验方法。

方法有所不同，相应的评判标准也有所不同。

①、在《化妆品安全技术规范》2022的征求意见稿中：

在稀释受试物时，一个受试物同时稀释到5%和0.05%两个浓度，溶剂为生理盐水，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法测定细胞的吸光度，计算出相应的细胞存活率。判断标准：

②、根据行业标准SN/T3084.2-2014进出口化妆品眼刺激性试验第2部分：角膜细胞试验方法，在稀释受试物时，统一稀释到0.5%，溶剂使用PBS，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法测定细胞的吸光度，计算出相应的细胞存活率。当这一次实验出现细胞存活率≤70%的情况，需要开始第二轮试验，受试物浓度不变与上一次实验相同，溶剂改用DMEM完全培养基，同样方法测试，最后计算相对细胞存活率。判断标准：

随着“3R”原则被越来越多人所认知以及动物实验替代技术的成熟，体外动物替代实验已是化妆品安全性评价发展的必然趋势。相比动物实验，角膜细胞试验具有经济成本低、方法容易掌握、毒性终点易于测定、重复性好、灵敏度高、方法易标准化、材料容易获取等优点，是更适合化妆品企业内部开展的“温和（无刺激）”宣称的实验室测试方法。

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