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  • 艾卓生物:NAGO SHARE ▏浅谈最小抑菌浓度(MIC)的方法及其应用!
    2022-10-24


    导语:在2021年国家化妆品监督抽检工作中,50批次化妆品不符合规定的通告,其中不乏存在微生物超标的情况。


    各国对化妆品防腐剂的使用均有相关规定,防腐剂的添加量也有严格规定,不允许超量使用。因此,配方设计时,防腐体系的构建是配方工程师必须考虑的问题。广义的防腐剂包括抑菌剂、杀菌剂、抗氧化剂以及食盐、辛香料等物质。下文以“抗(抑)菌产品”代指防腐剂、抑菌剂。




    要确保化妆品有足够的抗二次污染能力,产品中需要添加一定剂量的抗(抑)菌产品,确定合适的剂量,则涉及到一个概念:抗(抑)菌产品的最小抑菌浓度。抗(抑)菌产品的抑菌效率以最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)来表示,简称MIC。

    MIC定义

    能够抑制细菌生长、繁殖的最低药物浓度即最小抑菌浓度。
    MIC测试适用于

    测定出一个物质的最低抑菌浓度,用以评价该物质的抑菌能力。
    参考试验得到最小抑菌浓度,为实际生产添加用量提供理论依据。



    MIC方法简介

    Introduction to MIC Method



    MIC测试方法有很多种,根据化妆品抗(抑)菌产品类型及参考消毒技术规范2002,常见的测试方法有如下三种:琼脂稀释法、常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法(96孔板法)


    01
    琼脂稀释法

    * 本方法适用于不溶性抗(抑)菌产品





    原理:是将不同剂量的抗(抑)菌产品,加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中,制成含不同递减浓度抗(抑)菌产品的平板,接种受试菌,孵育后观察细菌生长情况,以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
    优点:可在一个平板上同时作多株菌MIC测定,结果可靠,易发现污染菌。
    缺点:制备含抗(抑)菌产品的琼脂平板费时费力。


    02
    常量肉汤稀释法
    * 本方法适用于可溶性抗(抑)菌产品


    原理:本试验将不同浓度的抑菌剂混合溶解于营养肉汤培养基中,然后接种细菌,通过细菌的生长与否,确定抗(抑)菌产品抑制受试菌生长的最低浓度,即最小抑菌浓度。
    优点:通过观察培养基是否浑浊较直观判定测试样品对特定菌种的MIC值。
    缺点:只能测试水溶性好且清澈透明的样品,而且肉眼观察有一定的误差。


    03
    微量肉汤稀释法(96孔板法)
    * 主要适用于需氧菌及局部兼性厌氧菌

    原理:将倍比稀释后不同浓度的抗(抑)菌产品溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中,第1至第11孔加样液,每孔10μl,第12孔不加样作为生长对照,冰冻干燥后密封,-20℃以下保存备用。接种物制备将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液,经 MH肉汤1:1000稀释后,向每孔中加100μl,密封后置35℃普通空气孵箱中,孵育16~20h判断结果。


    优点:能够更准确的得到细菌对某种抗(抑)菌产品的MIC值。
    缺点:操作较为繁琐。

    总结

    summary


    抗(抑)菌产品的MIC由试验方法求得,MIC越小抑菌活性越大,且同一抗(抑)菌产品对不同菌种有不同的MIC。理论上来说,抗(抑)菌产品添加量越高则抑菌效率越高,而实际上,我国对化妆品准用防腐剂和用量均有明确限制。

    如何在法规允许的前提下,建立一整套更加安全、温和的防腐抑菌解决方案?既要保证化妆品的抑菌性能,又要避免因防腐剂引起的对人体产生的刺激性、易过敏等副作用?答案便是:基于安全成分建立新型的防腐抑菌解决方案。

    在建立过程中,需要考虑不同抗(抑)菌产品的作用机制以及化妆品配方的剂型、成分等因素,通过复配的方式降低各抗(抑)菌产品单体的使用量,拓宽抗菌谱,提高抑菌效果,预防微生物耐药性的产生。

    如需了解更多产品的防腐抑菌解决方案,可以关注公众号进行留言!




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